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人睾丸酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:0
摘 要:目的:构建应用于酵母双杂交系统的人睾丸组织cDNA文库。方法:从正常人睾丸组织总RNA中纯化出mRNA,以SMARTШTM和CDSШ为引物,合成两端具有同源臂的双链cDNA,后者与线性质粒pGADT7
  • 【题 名】人睾丸酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定
  • 【作 者】郑英 张露萍 贾筱琴 王海燕
  • 【机 构】扬州大学医学院组织学与胚胎学教研室 江苏扬州225001 扬州大学医学院病理学教研室 江苏扬州225001
  • 【刊 名】《中华男科学杂志》2012年 第4期 310-313页 共4页
  • 【关键词】酵母双杂交 cDNA文库 人 睾丸
  • 【文 摘】目的:构建应用于酵母双杂交系统的人睾丸组织cDNA文库。方法:从正常人睾丸组织总RNA中纯化出mRNA,以SMARTШTM和CDSШ为引物,合成两端具有同源臂的双链cDNA,后者与线性质粒pGADT7-Rec共转化入感受态酵母细胞Y187,两者在酵母细胞中同源重组成环形的cDNA文库质粒,收集在营养缺陷培养板上筛选出的所有克隆,即为人睾丸酵母双杂交cDNA文库。结果:构建了具有基因多样性和库容量足够大的人睾丸cDNA文库,共获得2×106个转化子,插入的双链cDNA片段的长度在0.3~4.0 kb之间。结论:利用ClontechSMART技术,成功构建了应用于酵母双杂交的人睾丸组织cDNA文库,为探讨人精子发生的分子机制奠定了基础。
 
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