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酶标仪法5α-还原酶抑制剂体外筛选模型的建立

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:2
摘 要:目的:建立酶标仪法5α-还原酶抑制剂体外筛选模型。方法:取6只雌性sD大鼠肝脏制备5α-还原酶,检测酶活性后,利用96孔板、酶标仪及酶标仪法分析软件建立5α-还原酶抑制剂体外筛选模型,并通过已知5a.
  • 【题 名】酶标仪法5α-还原酶抑制剂体外筛选模型的建立
  • 【作 者】吴建辉 孙祖越
  • 【机 构】上海市计划生育科学研究所 中国生育调节药物毒理检测中心 上海200032
  • 【刊 名】《中华男科学杂志》2013年 第6期 483-486页 共4页
  • 【关键词】5α-还原酶抑制剂 筛药模型 体外 良性前列腺增生 大鼠
  • 【文 摘】目的:建立酶标仪法5α-还原酶抑制剂体外筛选模型。方法:取6只雌性sD大鼠肝脏制备5α-还原酶,检测酶活性后,利用96孔板、酶标仪及酶标仪法分析软件建立5α-还原酶抑制剂体外筛选模型,并通过已知5a.还原酶抑制剂爱普列特及非那甾胺验证模型的可靠性。实验分别设置0、30、60nmol/L爱普列特组及0、30、60nmoL/L非那甾胺组,96孔板依次加入终浓度0―40μmol/L系列睾酮溶液、22μmol/L的NADPH、终浓度0~60nmol/L爱普列特或0~60nmol/L非那甾胺及20μ15α-还原酶,Tris-HC1缓冲液将每孔溶液体积调至200μl。将96孔板放置于酶标仪中,分别测定0、10min的A340 nm,并对读取数据进行分析。结果:5α-还原酶的Km值为3.794μmol/L,Vmax为0.271μmol/(L・min);爱普列特的酶抑制常数(K,)为148.2nmol/L,半数抑制浓度(IC50)为31.5nmol/L,曲线图分析为反竞争性抑制剂;非那甾胺的Ki为158.8nmol/L,IC50为13.6nmol/L,曲线图分析为竞争性抑制剂;二者结果均同文献报道相同。结论:建立的体外快速筛选模型能够有效地筛选5α-还原酶抑制剂。
 
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