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BC022687基因真核表达质粒的构建及在CHO细胞内的蛋白表达和定位

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:0
摘 要:目的:BC022687可能是调节纤毛形成的蛋白。本研究构建BC022687基因真核表达载体并探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。方法:以小鼠睾丸cDNA文库为模板,PER扩增全长BC022687编码序列,
  • 【题 名】BC022687基因真核表达质粒的构建及在CHO细胞内的蛋白表达和定位
  • 【作 者】李红飞 张玲 石玉琴 汪智琼 江高峰 宋世震 付国庆 张志兵
  • 【机 构】武汉科技大学医学院公共卫生学院 湖北武汉430065 Departments of Obstetrics and Gynecology and Biochemistry Virginia Commonwealth University Richmond VA USA
  • 【刊 名】《中华男科学杂志》2013年 第5期 387-391页 共5页
  • 【关键词】BC022687基因 中心体 纤毛形成 CHO细胞
  • 【文 摘】目的:BC022687可能是调节纤毛形成的蛋白。本研究构建BC022687基因真核表达载体并探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。方法:以小鼠睾丸cDNA文库为模板,PER扩增全长BC022687编码序列,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的pEGFP-C1真核表达载体中。将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,提取细胞蛋白进行Western印迹检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察BC022687/GFP融合蛋白在CHO细胞内定位。结果:翻译BC022687蛋白的cDNA序列克隆到了真核表达载体pEGFP―C1中,酶切鉴定片段大小950bp。Western印迹检测到相对分子质量约为64000的融合蛋白表达。BC022687/GFP融合蛋白在细胞内定位以细胞质为主,并在中心体、纤毛形成的模板表达。结论:成功构建BC022687全长基因真核表达载体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
 
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  • (1) BC022687基因,中心体,纤毛形成,CHO细胞
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