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腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:0
摘 要:目的构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果。方法构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7
  • 【题 名】腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究
  • 【作 者】张靖 付彦超 康春生 张庆瑜 王涛 张洁
  • 【机 构】天津医科大学总医院消化科
  • 【刊 名】《中华内科杂志》2009年 第7期 557-561页 共5页
  • 【关键词】胃腺癌 腺病毒载体 P85 蛋白激酶B1 短发夹RNA
  • 【文 摘】目的构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果。方法构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Westernblot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达。以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性。构建裸鼠皮下荷瘤模型进-步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Aktl的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48h、72h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003)。与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P〈0.001),且tAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%-7.1%,而进人G0/G1期的细胞增加了12.1%~13.7%。裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡。结论腺病毒介导的靶向P85和Aktl的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略。
 
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