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前列腺癌免疫治疗中质粒pLenti6/V5-D-TOPO-TβRⅡDNglytk构建的意义及相应慢病毒的产生

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:0
摘 要:目的构建含有TβRⅡDNglytk的慢病毒质粒载体,生产出相应的慢病毒,用于对TGF―β失敏感的CTL的制备。方法先以原始质粒为模板,PCR扩增TβRⅡDN和HSV―tk基因,用重组PCR方法获得Tβ
  • 【题 名】前列腺癌免疫治疗中质粒pLenti6/V5-D-TOPO-TβRⅡDNglytk构建的意义及相应慢病毒的产生
  • 【作 者】杨阔 张婷 徐勇 畅继武 刘妍 张志宏
  • 【机 构】天津市泌尿外科研究所 天津市泌尿外科重点实验室 天津300211 天津医科大学第二医院泌尿外科
  • 【刊 名】《中华内分泌外科杂志》2009年 第5期 296-303页 共8页
  • 【关键词】前列腺癌 转化生长因子 慢病毒 肿瘤免疫治疗 基因转导
  • 【文 摘】目的构建含有TβRⅡDNglytk的慢病毒质粒载体,生产出相应的慢病毒,用于对TGF―β失敏感的CTL的制备。方法先以原始质粒为模板,PCR扩增TβRⅡDN和HSV―tk基因,用重组PCR方法获得TβRⅡDNglytk融合基因,用PCR扩增出TRANSglytk基因;再用TOPO克隆技术将其连接到慢病毒表达质粒,经测序验证;最后用Invitrogen公司提供的ViraPowerTMLentiviralSystem和293细胞合成慢病毒,并用293细胞完成其滴度测定。结果完成慢病毒质粒TβRⅡDNglytk的构建,经测序验证序列正确;生产的慢病毒具有感染能力,其滴度达到实验要求,叮用于对TGF―B不敏感的肿瘤特异性CTL的制备。结论运用重组PCR技术合成TβRⅡDNglytk及TRANSglytk两个融合基因,并用TOPO克隆技术连接到pLenti6/V5-D-TOPO载体,成功构建了慢病毒表达载体,说明此方法用于病毒载体的构建是快捷可行的;用ViraPowerTMLentiviralSystem和293FT细胞成功制备了慢病毒,为生产TGF―B不敏感的人肿瘤特异性CTL提供了基础。
 
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  • (1) 前列腺癌,转化生长因子,慢病毒,肿瘤免疫治疗,基因转导
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