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单磷酸腺苷激活的蛋白激酶在罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:0
摘 要:目的 评价单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)在罗哌卡因致神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用.方法 SH-SY5Y细胞在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中于37℃、5%CO2细胞培养
  • 【题 名】单磷酸腺苷激活的蛋白激酶在罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用
  • 【作 者】周树勤 卢俊 张庆国 许睿 赖露颖 徐世元
  • 【机 构】南方医科大学珠江医院麻醉科 广州市510282
  • 【刊 名】《中华麻醉学杂志》2011年 第2期 197-200页 共4页
  • 【关键词】蛋白激酶类 酰胺类 细胞凋亡
  • 【文 摘】目的 评价单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)在罗哌卡因致神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用.方法 SH-SY5Y细胞在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养.将SH-SY5Y细胞按5×105个/孔接种于6孔培养板中.采用随机数字表法,将培养孔随机分为5组:对照组(Ⅰ组)、空载体质粒pEGFP-N1组(Ⅱ组)、重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2组(Ⅲ组)、阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo NC组(Ⅳ组)和重组质粒pGPU6/GFP/Neo-shRNA AMPKα2组(Ⅴ组).Ⅰ组细胞不给予任何处理,其余各组按每孔4 μg质粒、10μl脂质体Lipofectamine2000转染SHSY5Y细胞.采用Western blot法测定AMPKα2蛋白表达水平.SH-SY5Y细胞经3 mmol/L罗哌卡因处理后,采用流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;采用MTT法检测细胞存活情况,计算细胞存活率;分别采用流式细胞术和Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率.结果 重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2可上调AMPKα2蛋白表达;而重组质粒pGPU6/GFP/Neo-shRNA AMPKα2可下调AMPKα2蛋白表达(P〈0.01).下调AMPKα2蛋白表达可抑制细胞内ROS的生成,抑制细胞凋亡;而上调AMPKα2蛋白表达可促进细胞内ROS的生成,导致细胞凋亡(P〈0.01).结论 罗哌卡因可通过激活AMPK引起SH-SY5Y细胞ROS生成增多,从而导致细胞凋亡.
 
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