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一步法流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量反转录聚合酶链反应方法的建立及应用

放大字体  缩小字体 更新日期:2016-02-09  浏览次数:2
摘 要:目的建立一种特异、灵敏、快速检测流行性乙型脑炎(乙脑)病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据GenBank登录的乙脑病毒毒株序列,应用生物软件在乙脑病毒基因的保守区设计与筛选引物和探针,对荧光定量R
  • 【题 名】一步法流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量反转录聚合酶链反应方法的建立及应用
  • 【作 者】谢荣辉 徐芳 朱函坪 程胤凯 傅桂明 姚苹苹 翁景清 卢亦愚 杨章女 朱智勇
  • 【机 构】浙江省疾病预防控制中心出血热重点实验室 杭州310051
  • 【刊 名】《中华流行病学杂志》2009年 第3期 277-280页 共4页
  • 【关键词】流行性乙型脑炎病毒 荧光定量反转录-聚合酶链反应 检测
  • 【文 摘】目的建立一种特异、灵敏、快速检测流行性乙型脑炎(乙脑)病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据GenBank登录的乙脑病毒毒株序列,应用生物软件在乙脑病毒基因的保守区设计与筛选引物和探针,对荧光定量RT-PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性和重复性。并通过对蚊虫样本的检测,以评价该方法的实际应用价值。结果优化结果表明荧光定量RT-PCR的最佳反应体系为0.1gmol/L探针浓度,0.2gmol/L引物浓度,5mmol/L Mg^2+浓度。结果表明该方法对乙脑病毒的检测有高度的特异性、通用性,对1~4型登革热病毒、狂犬病毒、汉坦病毒(SEO型与HTN型)均无交叉反应,检测的灵敏度达0.1TCID50,重复性分析表明同一样品Ct值的重复检测4次,其标准差均在合理范围内,分别为0.033、0.079、0.149和0.411。对110批蚊虫标本进行荧光定量RT-PCR检测和病毒分离检测,结果荧光定量RT-PCR检测出7份阳性,而病毒分离则只检测出3份阳性,表明建立的荧光定量RT-PCR方法更敏感,可直接从蚊虫样本中检测乙脑病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右,且操作简便、敏感性高。结论研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR的方法具有特异、敏感、快速的特点,适用于乙脑病原学的快速检测。
 
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